Kompleti i ADN -së gjenomike të gjakut TGuide

A-1 Përqendrim i ulët i qelizave ose virusit në mostrën fillestare-Pasuroni përqendrimin e qelizave ose viruseve.

A-2 Liza e pamjaftueshme e mostrave-Mostrat nuk janë përzier plotësisht me tamponin e lizës. Sugjerohet që të përzihet tërësisht me pulsim-vorbullim për 1-2 herë. - Liza e pamjaftueshme e qelizave e shkaktuar nga ulja e aktivitetit të proteinazës K. - Liza e pamjaftueshme e qelizave ose degradimi i proteinave për shkak të kohës së pamjaftueshme të banjës së ngrohtë. Sugjerohet prerja e indeve në copa të vogla dhe zgjatja e kohës së banjës për të hequr të gjitha mbetjet në lizate.

A-3 Adsorbimi i pamjaftueshëm i ADN-së. -Asnjë etanol ose përqindje e ulët në vend të etanolit 100% nuk ​​u shtua para se lisiati të transferohej në kolonën e rrotullimit.

A-4 Vlera e pH e tamponit të elucionit është shumë e ulët. -Rregulloni pH në mes 8.0-8.3.

Etanol i mbetur në shpëlarës.

-Ka mbeturinë tampon larës PW në shpëlarës. Etanoli mund të hiqet duke centrifuguar kolonën rrotulluese për 3-5 min, dhe më pas duke e vendosur në temperaturën e dhomës ose inkubatorin 50 ℃ për 1-2 min.

A-1 Mostra nuk është e freskët. - Nxirrni një ADN mostër pozitive si kontroll për të përcaktuar nëse ADN -ja në mostër është degraduar.

A-2 Para-trajtim i papërshtatshëm. - Shkaktuar nga bluarja e tepërt e azotit të lëngët, rifitimi i lagështirës ose sasia shumë e madhe e mostrës.

Para -trajtimet duhet të ndryshojnë për mostra të ndryshme. Për mostrat e bimëve, sigurohuni që të bluani plotësisht azotin e lëngshëm. Për mostrat e kafshëve, homogjenizoni ose bluajeni plotësisht në azot të lëngshëm. Për mostrat me mure qelizore që janë të vështira për t'u thyer, të tilla si bakteret G+ dhe majaja, sugjerohet të përdorni lizozimë, litikazë ose metoda mekanike për të thyer muret e qelizave.

4992201/4992202 Kit i ADN-së gjenomike të bimëve miraton një metodë të bazuar në kolonë që kërkon kloroform për nxjerrjen. Especiallyshtë veçanërisht i përshtatshëm për mostra të ndryshme bimore, si dhe pluhur të thatë të bimëve. Kompleti i bimëve Hi-DNAsecure është gjithashtu i bazuar në kolona, ​​por pa nevojë për nxjerrjen e fenolit/kloroformit, duke e bërë atë të sigurt dhe jo toksik. Shtë i përshtatshëm për bimët me përmbajtje të lartë polisaharide dhe polifenol. 4992709/4992710 DNAquick Plant System miraton një metodë të bazuar në lëngje. Ekstraktimi i fenolit/kloroformit gjithashtu nuk është i nevojshëm. Procedura e pastrimit është e thjeshtë dhe e shpejtë pa kufi për sasitë e fillimit të mostrës, kështu që përdoruesit mund të rregullojnë sasinë në mënyrë fleksibile sipas kërkesave eksperimentale. Madhësia e madhe e fragmenteve të gDNA mund të merret me rendiment të lartë.

ADN -ja gjenomike është nxjerrë nga vëllime të ndryshme të mostrave të gjakut të plotë të njeriut nga Kit TNAamp Blood DNA. Rezultatet janë si më poshtë. Rezultatet janë të listuara vetëm si referencë, rezultatet aktuale të nxjerrjes varen nga kushtet e mostrave.

Nxjerrja e ADN -së së mpiksjes së gjakut mund të kryhet duke përdorur reagentët e dhënë në këto dy komplete, thjesht duke ndryshuar protokollin në udhëzimin specifik për nxjerrjen e ADN -së së mpiksjes së gjakut. Kopja e butë e protokollit të nxjerrjes së ADN -së së mpiksjes së gjakut mund të lëshohet me kërkesë.

Pezulloni mostrën e freskët me 1 ml PBS, kripë normale ose tampon TE. Homogjenizoni plotësisht mostrën me një homogjenizues dhe mblidhni precipitatin në fund të një tubi me centrifugim. Hidheni supernatantin, dhe rifilloni precipitatin me 200 μl tampon GA. Pastrimi i mëposhtëm i ADN -së mund të kryhet sipas udhëzimit.

Për pastrimin e gDNA në mostrat e plazmës, serumit dhe lëngjeve të trupit, rekomandohet TIANamp Micro DNA Kit. Për pastrimin e gDNA të virusit nga mostrat e serumit/plazmës, rekomandohet Kompleti ADN/ARN i virusit TIANamp. Për pastrimin e gDNA bakteriale nga mostrat e serumit dhe plazmës, rekomandohet TIANamp Bacteria DNA Kit (lizozima duhet të përfshihet për bakterie pozitive). Për mostrat e pështymës, rekomandohet Hi-Swab DNA Kit dhe TIANamp Bacteria DNA Kit.

Kompleti i bimëve të sigurimit të ADN -së ose sistemi i bimëve të ADN -së së shpejtë rekomandohen për nxjerrjen e gjenomit të kërpudhave. Për nxjerrjen e gjenomit të majave, rekomandohet TIANamp Yeast DNA Kit (litikaza duhet të përgatitet vetë).