Kompleti i gjakut/qelizës/indit të ARN -së TGuide S96

A-1 Liza ose homogjenizimi i qelizave nuk është i mjaftueshëm

---- Ulni përdorimin e mostrës, rrisni sasinë e tamponit të lizës, rrisni homogjenizimin dhe kohën e lizës.

A-2 Sasia e mostrës është shumë e madhe

---- Ulni sasinë e mostrës së përdorur ose rrisni sasinë e tamponit të lizës.

A-1 Liza ose homogjenizimi i pamjaftueshëm i qelizave

---- Ulni përdorimin e mostrës, rrisni sasinë e tamponit të lizës, rrisni homogjenizimin dhe kohën e lizës.

A-2 Sasia e mostrës është shumë e madhe

---- Ju lutemi referojuni kapacitetit maksimal të përpunimit.

ARN-ja A-3 nuk është nxjerrë plotësisht nga kolona

---- Pasi të shtoni ujë pa RNase, lëreni për disa minuta para se të centrifugoni.

A-4 Etanol në eluent

---- Pas shpëlarjes, centrifugoni përsëri dhe hiqni tamponin e larjes sa më shumë që të jetë e mundur.

Mjeti i kulturës A-5 Cell nuk është hequr plotësisht

---- Kur grumbulloni qeliza, ju lutemi sigurohuni që të hiqni mediumin e kulturës sa më shumë që të jetë e mundur.

A-6 Qelizat e ruajtura në RNAstore nuk janë centrifuguar në mënyrë efektive

---- Dendësia e dyqaneve ARN është më e madhe se mediumi mesatar i kulturës qelizore; kështu që forca centrifugale duhet të rritet. Sugjerohet të centrifugohet në 3000x g.

A-7 Përmbajtja e ulët e ARN-së dhe bollëku në mostër

---- Përdorni një mostër pozitive për të përcaktuar nëse rendimenti i ulët është shkaktuar nga mostra.

A-1 Materiali nuk është i freskët

---- Indet e freskëta duhet të ruhen në azot të lëngshëm menjëherë ose menjëherë të futen në reagentin e ARNstore për të siguruar efektin e nxjerrjes.

A-2 Sasia e mostrës është shumë e madhe

---- Ulni sasinë e mostrës.

Ndotja A-3 RNasen

---- Edhe pse tamponi i dhënë në komplet nuk përmban RNase, është e lehtë të kontaminoni RNase gjatë procesit të nxjerrjes dhe duhet të trajtohet me kujdes.

A-4 Ndotja e elektroforezës

---- Zëvendësoni tamponin e elektroforezës dhe sigurohuni që materialet harxhuese dhe tamponi i ngarkimit të jenë pa ndotje të RNase.

A-5 Ngarkesë e madhe për elektroforezë

---- Ulni sasinë e ngarkimit të mostrës, ngarkimi i secilit pus nuk duhet të kalojë 2 μg.

A-1 Sasia e mostrës është shumë e madhe

---- Ulni sasinë e mostrës.

A-2 Disa mostra kanë përmbajtje të lartë të ADN-së dhe mund të trajtohen me DNase.

---- Kryeni trajtim DNase pa RNase në tretësirën e marrë të ARN-së, dhe ARN-ja mund të përdoret drejtpërdrejt për eksperimentet pasuese pas trajtimit, ose mund të pastrohet më tej nga komplete pastrimi ARN.

Për qelqe, të pjekura në 150 ° C për 4 orë. Për kontejnerët plastikë, të zhytur në 0.5 M NaOH për 10 min, pastaj shpëlahen plotësisht me ujë pa RNase dhe më pas sterilizohen për të hequr plotësisht RNase. Reagentët ose zgjidhjet e përdorura në eksperiment, veçanërisht uji, duhet të jenë pa RNase. Përdorni ujë pa RNase për të gjitha përgatitjet e reagentëve (shtoni ujë në një shishe qelqi të pastër, shtoni DEPC në një përqendrim përfundimtar prej 0.1% (V/V), shkundni brenda natës dhe autoklavë).