Kompleti i PCR i gjakut i drejtpërdrejtë

Përforcimi i shpejtë i gjenit të synuar duke përdorur drejtpërdrejt gjakun si model pa nxjerrje.

Ky komplet miraton një polimerazë të ADN-së anti-frenuese të gjeneruar gjenetikisht për të amplifikuar në mënyrë efikase gjenet e një kopjimi në gjenomin njerëzor. Sistemi tampon i optimizuar mirë në këtë çantë ndihmon polimerazën t'i rezistojë fuqishëm frenimit të frenuesve të PCR, kështu që mund të amplifikojë drejtpërdrejt ADN -në duke përdorur gjak dhe qeliza të kultivuara si shabllone. Ky produkt është i lehtë për tu përdorur dhe nuk kërkon hapa të ndërlikuar siç është pastrimi i ADN -së ose para -trajtimi i mostrës.
Ky komplet ofrohet si MasterMix 2, dhe reagimi mund të kryhet duke shtuar thjesht shabllonin e gjakut dhe abetaret përkatëse të zbulimit. Mund të aplikohet në qelizat e kultivuara të gjitarëve si njerëzit, minjtë, derrat, gjedhët dhe speciet e tjera, si dhe gjakun e plotë të freskët ose 4 ℃ të krioperuar, antikoagulant (EDTA, citrat, heparin), mpiksjen e gjakut të lëngëzuar dhe njollat e thata të gjakut ruhet në kartat komerciale Whatman 903 dhe FTA Elute.

Mace. Jo	Madhësia e Paketimit
4992529	20 µl × 100 rxn
4992530	20 µl × 500 rxn

Na dërgoni email

Detajet e produktit

Shembull eksperimental

FAQ

Etiketat e produktit

Karakteristikat

■ E thjeshtë dhe e shpejtë: amplifikimi i PCR mund të kryhet drejtpërdrejt duke përdorur gjak si model, pa pasur nevojë për hapat e lodhshëm të përgatitjes së mostrës dhe nxjerrjes së ADN -së.
Pur Pastërti e lartë: Kalimi i para-trajtimit të mostrës dhe hapat e nxjerrjes së ADN-së mund të ndihmojnë për të shmangur ndotjen e kryqëzuar të mostrave.
Through Prodhim i lartë: Identifikimi i PCR për mostrat në shkallë të gjerë mund të kryhet duke kombinuar kompletin me pllaka PCR 96/384-puse.
Univers Universalitet i fortë: Ky komplet mund të amplifikojë në mënyrë efikase fragmente të larta GC ose fragmente me strukturë dytësore komplekse, dhe gjatësia e amplifikimit mund të jetë deri në 5 kb.
Resistance Rezistencë e fortë ndaj stresit: Ky komplet mund të aplikohet për lloje të ndryshme dhe mostra gjaku të ruajtura në mënyra të ndryshme.

Aplikimet

Produktet PCR të këtij kompleti përmbajnë "A" në skajin 3′, i cili mund të përdoret drejtpërdrejt për klonimin e vektorit TA. Ky komplet mund të përdoret për amplifikimin e fragmenteve të ADN-së gjenomike, analizën gjenetike me qarkullim të lartë dhe analizën e gjenotipizimit (siç është zbulimi i gjeneve).

Të gjitha produktet mund të personalizohen për ODM/OEM. Per detaje,ju lutemi klikoni Shërbimi i personalizuar (ODM/OEM)

I mëparshëm: TIANcombi ADN Lyse & Det PCR Kit

Tjetra: Kompleti PCR i Indit të Miut Direkt

	Duke përdorur antikoagulimin EDTA njerëzor si model, 4 gjene me përmbajtje të ndryshme GC u përforcuan me Kit Direct PCR Kit. Sistemi i reagimit PCR ishte 20 μl, dhe 1 μl gjak u përdor si model. M: TIANGEN Shënuesi II; 1: Madhësia e fragmentit 1090 bp, përmbajtja e GC 68.1%; 2: Madhësia e fragmentit 1915 bp, përmbajtja e GC 70.4%; 3: Madhësia e fragmentit 448 bp, përmbajtja e GC 74.8%; 4: Madhësia e fragmentit 1527 bp, përmbajtja e GC 61.5%. Rezultatet eksperimentale: Kit Direct PCR Kit Blood mund të amplifikojë në mënyrë efektive fragmentet e ADN-së me përmbajtjen e GC në rangun prej 61.5%-74.8%, duke sugjeruar se është i aftë të amplifikojë fragmente me GC të lartë.
	Duke përdorur antikoagulimin EDTA njerëzor si model, 5 gjene me gjatësi të ndryshme (ActB, Prp, DN1.0, Hn2.0 dhe Hn4.0) u amplifikuan me Kit Direct PCR Kit. Sistemi i reagimit PCR ishte 20 μl, dhe 1 μl gjak u përdor si model. M: TIANGEN Shënuesi II; 1-3: 3 mostra të ndryshme gjaku; NTC: kontroll pa abetare. Rezultatet eksperimentale: Kit Direct PCR Kit mund të amplifikojë fragmente me gjatësi deri në 4 kb, duke sugjeruar se është i aftë të amplifikojë fragmente të gjata.
	Duke përdorur antikoagulimin EDTA njerëzor si model, Kit Direct PCR Kit u përdor për zbulimin e PCR të mostrave të ndryshme të gjakut. Sistemi i reagimit PCR ishte 20 μl, dhe 1 μl gjak u përdor si model. M: TIANGEN Shënuesi II; 1-9: sasia e ngarkimit të gjakut është 0.1 μl, 0.2 μl, 0.3 μl, 0.4 μl, 1 μl, 2 μl, 3 μl, 4 μl dhe 5 μl, respektivisht; NTC: kontroll pa shabllon Rezultatet eksperimentale: Kit Direct PCR Blood ka rezistencë të fortë ndaj gjakut dhe mund të amplifikojë mostrat e gjakut me gamën e ngarkimit prej 0.1-5 μl.
	Mostrat e gjakut nga njerëzit, miu, pula dhe lloje të tjera me trajtime të ndryshme u përdorën si shabllone. Kit Direct PCR Blood u përdor për të amplifikuar PRNP (njerëzore, 750 bp), Actin (miu, 200 bp) dhe β-Actin (Chicken, 1.0 kb). Sistemi i reagimit PCR ishte 20 μl, dhe 1 μl gjak u përdor si model. M: TIANGEN Shënuesi II. Rezultatet eksperimentale: Kit Direct PCR Kit mund të aplikohet në një gamë të gjerë mostrash, dhe zbulimi i drejtpërdrejtë i PCR mund të kryhet në mostrat e gjakut nga specie të ndryshme me trajtime të ndryshme.

Pyetje: Asnjë brez amplifikimi

Modeli A-1

■ Shablloni përmban papastërti të proteinave ose frenues të Taq, etj. —— Pastroni modelin e ADN -së, hiqni papastërtitë e proteinave ose nxirrni ADN -në e shabllonit me komplete pastrimi.

■ Çnatyrimi i shabllonit nuk është i plotë —— Rritni në mënyrë të përshtatshme temperaturën e denatyrimit dhe zgjasni kohën e denatyrimit.

Deg Degradimi i modelit ——Përgatitni sërish shabllonin.

Abetare A-2

Quality Cilësi e dobët e abetareve —— Ri-sintetizoni abetaren.

Deg Degradimi i abetareve - —Aksitoni abetaret me përqendrim të lartë në vëllim të vogël për ruajtje. Shmangni ngrirjen dhe shkrirjen e shumëfishtë ose krio-ruajtur afatgjatë 4 ° C.

Design Dizajnimi jo i duhur i abetareve (p.sh. gjatësia e abetareve nuk është e mjaftueshme, dimeri i formuar midis abetareve, etj.)

A-3 Mg²⁺përqendrimit

■ Mg²⁺ Përqendrimi është shumë i ulët —— Rritni siç duhet Mg²⁺përqendrimi: Optimizoni Mg²⁺ përqendrimi nga një seri reagimesh nga 1 mM në 3 mM me një interval prej 0.5 mM për të përcaktuar Mg optimale²⁺ përqendrim për çdo shabllon dhe abetare.

A-4 Temperatura e pjekjes

Temperature Temperatura e lartë e pjekjes ndikon në lidhjen e abetares dhe shabllonit. —— Ulni temperaturën e pjekjes dhe optimizoni gjendjen me një gradient prej 2 ° C.

A-5 Koha e zgjatjes

Time Koha e shkurtër e zgjatjes —— Rritja e kohës së zgjatjes.

P: Pozitiv i rremë

Fenomene: Mostrat negative gjithashtu tregojnë brezat e sekuencave të synuara.

A-1 Kontaminimi i PCR

Ndotja e kryqëzuar e sekuencës së synuar ose produkteve të amplifikimit —— Me kujdes që të mos pipetoni mostrën që përmban sekuencën e synuar në mostrën negative ose mos i derdhni nga tubi i centrifugës. Reagentët ose pajisjet duhet të autoklavohen për të eliminuar acidet nukleike ekzistuese, dhe ekzistenca e ndotjes duhet të përcaktohet përmes eksperimenteve të kontrollit negativ.

Ndotja e reagentit —— Lini reagentët dhe ruajini në temperaturë të ulët.

A-2 Primer

■ Mg²⁺ Përqendrimi është shumë i ulët —— Rritni siç duhet Mg²⁺ përqendrimi: Optimizoni Mg²⁺ përqendrimi nga një seri reagimesh nga 1 mM në 3 mM me një interval prej 0.5 mM për të përcaktuar Mg optimale²⁺ përqendrim për çdo shabllon dhe abetare.

Design Hartimi i parregullt i abetareve, dhe sekuenca e synuar ka homologji me sekuencën jo të synuar. —— Abetaret e ri-dizajnuara.

P: Përforcim jo-specifik

Fenomene: Shiritat e amplifikimit PCR nuk janë në përputhje me madhësinë e pritshme, të mëdha ose të vogla, ose ndonjëherë ndodhin të dyja brezat e amplifikimit specifik dhe brezat e amplifikimit jo-specifik.

Abetare A-1

Specific Specifikë e dobët e abetareve

—— Abetare e ridizajnuar.

Concentration Përqendrimi i abetareve është shumë i lartë —— Rritni siç duhet temperaturën e denatyrimit dhe zgjasni kohën e denatyrimit.

A-2 Mg²⁺ përqendrimit

■ Mg²⁺ përqendrimi është shumë i lartë —— Ulni siç duhet përqendrimin e Mg2+: Optimizoni Mg²⁺ përqendrimi nga një seri reagimesh nga 1 mM në 3 mM me një interval prej 0.5 mM për të përcaktuar Mg optimale²⁺ përqendrim për çdo shabllon dhe abetare.

A-3 Polimerazë termostabile

Amount Sasia e tepërt e enzimës —— Reduktoni sasinë e enzimës në mënyrë të përshtatshme në intervale prej 0.5 U.

A-4 Temperatura e pjekjes

Temperature Temperatura e pjekjes është shumë e ulët —— Rritni në mënyrë të përshtatshme temperaturën e pjekjes ose miratoni metodën e pjekjes me dy faza

Ciklet A-5 PCR

■ Shumë cikle PCR —— Zvogëloni numrin e cikleve të PCR.

Pyetje: Shirita me njolla ose njollosje

Abetare A-1—— Specifikiteti i dobët —— Rizajnoni abetaren, ndryshoni pozicionin dhe gjatësinë e abetares për të rritur specifikën e saj; ose të kryejë PCR të futur.

ADN-ja e modelit A-2

—— Shablloni nuk është i pastër ——Pastroni shabllonin ose nxirrni ADN -në me komplete pastrimi.

A-3 Mg²⁺ përqendrimit

- —Mg²⁺ përqendrimi është shumë i lartë —— Ulni siç duhet Mg²⁺ përqendrimi: Optimizoni Mg²⁺ përqendrimi nga një seri reagimesh nga 1 mM në 3 mM me një interval prej 0.5 mM për të përcaktuar Mg optimale²⁺ përqendrim për çdo shabllon dhe abetare.

A-4 dNTP

—— Përqendrimi i dNTP -ve është shumë i lartë ——Ulni përqendrimin e dNTP -së në mënyrë të përshtatshme

A-5 Temperatura e pjekjes

—— Temperaturë shumë e ulët e pjekjes —— Rritni në mënyrë të përshtatshme temperaturën e pjekjes

Ciklet A-6

—— Shumë cikle —— Optimizoni numrin e ciklit

Pyetje: Sa ADN shabllon duhet shtuar në një sistem reagimi PCR 50 μl?

Pyetje: Si të amplifikoni fragmente të gjata?

Hapi i parë është të zgjidhni polimerazën e duhur. Polimeraza e rregullt Taq nuk mund të korrigjohet për shkak të mungesës së aktivitetit të ekzonukleazës 3'-5 'dhe mospërputhja do të zvogëlojë shumë efikasitetin e zgjerimit të fragmenteve. Prandaj, polimeraza e rregullt Taq nuk mund të amplifikojë në mënyrë efektive fragmentet e synuara më të mëdha se 5 kb. Polimeraza Taq me modifikim të veçantë ose polimerazë tjetër me besnikëri të lartë duhet të zgjidhet për të përmirësuar efikasitetin e zgjerimit dhe për të përmbushur nevojat e amplifikimit të fragmenteve të gjata. Për më tepër, amplifikimi i fragmenteve të gjata kërkon gjithashtu rregullimin përkatës të modelit të abetareve, kohën e çnaturimit, kohën e zgjatjes, pH tampon, etj. Zakonisht, abetaret me 18-24 bp mund të çojnë në rendiment më të mirë. Për të parandaluar dëmtimin e shabllonit, koha e denatyrimit në 94 ° C duhet të reduktohet në 30 sek ose më pak për cikël, dhe koha për të rritur temperaturën në 94 ° C para amplifikimit duhet të jetë më pak se 1 min. Për më tepër, vendosja e temperaturës së shtrirjes në rreth 68 ° C dhe dizajnimi i kohës së zgjatjes sipas shkallës prej 1 kb/min mund të sigurojë amplifikim efektiv të fragmenteve të gjata.

Pyetje: Si të përmirësohet besnikëria e amplifikimit të PCR?

Shkalla e gabimit të amplifikimit PCR mund të zvogëlohet duke përdorur polimeraza të ndryshme të ADN -së me besnikëri të lartë. Ndër të gjitha polimerazat e ADN -së Taq të gjetura deri më tani, enzima Pfu ka shkallën më të ulët të gabimit dhe besnikërinë më të lartë (shiko tabelën e bashkangjitur). Përveç përzgjedhjes së enzimave, studiuesit mund të zvogëlojnë më tej shkallën e mutacionit të PCR duke optimizuar kushtet e reagimit, duke përfshirë optimizimin e përbërjes tampon, përqendrimin e polimerazës termostabile dhe optimizimin e numrit të ciklit të PCR.

Shkruani mesazhin tuaj këtu dhe na dërgoni