2 × Pfu PCR Mix

Ultra-pastër besnikëri e lartë Taq ADN polimerazë.

Pfu ADN Polimeraza shprehet nga E.coli me gjenin e polonerazës së ADN -së të klonuar Pyrococus Furiosis dhe pastrohet dhe ndahet me pastrim të shumëfishtë të kolonave. Për shkak se Pfu ka aktivitet exonukleazë 3′-5,, mund të korrigjohet në procesin e amplifikimit të ADN-së, ndërsa polimeraza tradicionale Taq e ADN-së nuk mundet. Edhe pse polimerazat e tjera të ADN -së Taq si Vent, Deep Vent, Tli, UITma, etj. Kanë funksione korrigjimi, Pfu ka shkallën më të ulët të mospërputhjes midis të gjitha polimerazave të Taq të ADN -së të gjetura deri më tani. Pfu ADN Polymerase ka qëndrueshmëri më të mirë termike sesa polimeraza e zakonshme Taq e ADN -së, dhe mund të mbajë më shumë se 90% aktivitet në 95 ° C për 1 orë.

Përzierje Pfu PCR me një tub (Certifikimi Kombëtar i Produkteve të Teknologjisë së Lartë)

■ Përzierja Pfu PCR ka përmirësuar specifikën dhe ndjeshmërinë e reagimit të PCR dhe mund të amplifikojë modele komplekse me përmbajtje të lartë GC, strukturë dytësore dhe të ngjashme. Mund të amplifikohen deri në 2 kopje të modelit të synuar, duke siguruar rezultate më të sakta eksperimentale.

Formula Formula unike Pfu MasterMix e bën të gjithë sistemin e reagimit shumë të qëndrueshëm dhe aktiviteti nuk do të ndikohet nga ngrirja-shkrirja e përsëritur ose ruajtja afatgjatë në 4 ° C.

Solution Zgjidhja e qëndrueshme dhe efikase e përzierjes së PCR e përgatitur paraprakisht mund ta bëjë operacionin të shpejtë dhe të thjeshtë, duke zvogëluar shumë intensitetin e punës dhe gabimin e marrjes së mostrave. Përmirësuesi dhe optimizuesi i PCR me performancë të lartë përfshihen gjithashtu në përzierje, gjë që zvogëlon kërkesat për kushtet e PCR.

Ky produkt ka sisteme që përmbajnë bojë dhe pa ngjyra. Produktet që përmbajnë ngjyra PCR Mix mund të elektroforezohen drejtpërdrejt pas PCR, pa shtuar tampon të mostrës.

Mace. Jo Madhësia e Paketimit
4992780 1ml
4992781 5*1ml
4992782 1ml
4992906 5*1ml

Detajet e produktit

Rrjedha e punës

FAQ

Etiketat e produktit

Përkufizimi i aktivitetit

Aktiviteti i 1 njësisë (U) Pfu ADN Polymerase përcaktohet si sasia e enzimës që kërkohet për të inkorporuar 10 nmol deoksinukleotide në substanca të patretshme në acid në 74 ° C brenda 30 minutash duke përdorur ADN-në e spermës së salmonit të aktivizuar si një shabllon/abetare.

Kontrolli i cilësisë

Pastërtia me zbulimin SDS-PAGE është më shumë se 99%; Asnjë aktivitet i nukleazës ekzogjene nuk zbulohet; Gjeni i vetëm i kopjuar në gjenomin njerëzor mund të amplifikohet në mënyrë efektive; Asnjë aktivitet i rëndësishëm nuk ruhet kur ruhet në temperaturën e dhomës për një javë.

Parametrat Teknike Kryesore

Ka aktivitet 3′-5 ′ exonukleazë dhe asnjë aktivitet 5′-3 ′ exonuclease. Shpejtësia e zgjerimit të amplifikimit të ADN-së është më e ulët se ajo e polimerazës Taq, dhe në përgjithësi shpejtësia e zgjatjes së enzimës Pfu është 0.5-1 kb në minutë. Stabiliteti termik i Pfu është më i mirë se Taq. Për modelet me përmbajtje të lartë të GC, temperatura e denatyrimit mund të rritet në 98 ° C, gjë që nuk ka efekt në aktivitetin e polimerazës Pfu. Produkti PCR është i hapur, i cili mund të shtohet me dalje 3'-dA para se të lidhet me vektorin TA ose të klonohet me vektor me fund të hapur

Aplikimet

Mund të përdoret për amplifikimin e besnikërisë së lartë të ADN-së, të tilla si klonimi i shprehjes së gjeneve, mutacioni i drejtuar në vend, analiza e polimorfizmit të një nukleotidi (SNP) dhe riparimi i fundit.

Të gjitha produktet mund të personalizohen për ODM/OEM. Per detaje,ju lutemi klikoni Shërbimi i personalizuar (ODM/OEM)


  • I mëparshëm:
  • Tjetra:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental ExampleExperimental Example Përdorni ADN -në gjenomike si model për të amplifikuar fragmentin 1kb.
    Pas reagimit të PCR, merrni 5 μl për zbulimin e elektroforezës.
    Pyetje: Asnjë brez amplifikimi

    Modeli A-1

    ■ Shablloni përmban papastërti të proteinave ose frenues të Taq, etj. —— Pastroni modelin e ADN -së, hiqni papastërtitë e proteinave ose nxirrni ADN -në e shabllonit me komplete pastrimi.

    ■ Çnatyrimi i shabllonit nuk është i plotë —— Rritni në mënyrë të përshtatshme temperaturën e denatyrimit dhe zgjasni kohën e denatyrimit.

    Deg Degradimi i modelit ——Përgatitni sërish shabllonin.

    Abetare A-2

    Quality Cilësi e dobët e abetareve —— Ri-sintetizoni abetaren.

    Deg Degradimi i abetareve - —Aksitoni abetaret me përqendrim të lartë në vëllim të vogël për ruajtje. Shmangni ngrirjen dhe shkrirjen e shumëfishtë ose krio-ruajtur afatgjatë 4 ° C.

    Design Dizajnimi jo i duhur i abetareve (p.sh. gjatësia e abetareve nuk është e mjaftueshme, dimeri i formuar midis abetareve, etj.)

    A-3 Mg2+përqendrimit

    ■ Mg2+ Përqendrimi është shumë i ulët —— Rritni siç duhet Mg2+ përqendrimi: Optimizoni Mg2+ përqendrimi nga një seri reagimesh nga 1 mM në 3 mM me një interval prej 0.5 mM për të përcaktuar Mg optimale2+ përqendrim për çdo shabllon dhe abetare.

    A-4 Temperatura e pjekjes

    Temperature Temperatura e lartë e pjekjes ndikon në lidhjen e abetares dhe shabllonit. —— Ulni temperaturën e pjekjes dhe optimizoni gjendjen me një gradient prej 2 ° C.

    A-5 Koha e zgjatjes

    Time Koha e shkurtër e zgjatjes —— Rritja e kohës së zgjatjes.

    P: Pozitiv i rremë

    Fenomene: Mostrat negative gjithashtu tregojnë brezat e sekuencave të synuara.

    A-1 Kontaminimi i PCR

    Ndotja e kryqëzuar e sekuencës së synuar ose produkteve të amplifikimit —— Me kujdes që të mos pipetoni mostrën që përmban sekuencën e synuar në mostrën negative ose mos i derdhni nga tubi i centrifugës. Reagentët ose pajisjet duhet të autoklavohen për të eliminuar acidet nukleike ekzistuese, dhe ekzistenca e ndotjes duhet të përcaktohet përmes eksperimenteve të kontrollit negativ.

    Ndotja e reagentit —— Lini reagentët dhe ruajini në temperaturë të ulët.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ Përqendrimi është shumë i ulët —— Rritni siç duhet Mg2+ përqendrimi: Optimizoni Mg2+ përqendrimi nga një seri reagimesh nga 1 mM në 3 mM me një interval prej 0.5 mM për të përcaktuar Mg optimale2+ përqendrim për çdo shabllon dhe abetare.

    Design Hartimi i parregullt i abetareve, dhe sekuenca e synuar ka homologji me sekuencën jo të synuar. —— Abetaret e ri-dizajnuara.

    P: Përforcim jo-specifik

    Fenomene: Shiritat e amplifikimit PCR nuk janë në përputhje me madhësinë e pritshme, të mëdha ose të vogla, ose ndonjëherë ndodhin të dyja brezat e amplifikimit specifik dhe brezat e amplifikimit jo-specifik.

    Abetare A-1

    Specific Specifikë e dobët e abetareve

    —— Abetare e ridizajnuar.

    Concentration Përqendrimi i abetareve është shumë i lartë —— Rritni siç duhet temperaturën e denatyrimit dhe zgjasni kohën e denatyrimit.

    A-2 Mg2+ përqendrimit

    ■ Mg2+ përqendrimi është shumë i lartë —— Ulni siç duhet përqendrimin e Mg2+: Optimizoni Mg2+ përqendrimi nga një seri reagimesh nga 1 mM në 3 mM me një interval prej 0.5 mM për të përcaktuar Mg optimale2+ përqendrim për çdo shabllon dhe abetare.

    A-3 Polimerazë termostabile

    Amount Sasia e tepërt e enzimës —— Reduktoni sasinë e enzimës në mënyrë të përshtatshme në intervale prej 0.5 U.

    A-4 Temperatura e pjekjes

    Temperature Temperatura e pjekjes është shumë e ulët —— Rritni në mënyrë të përshtatshme temperaturën e pjekjes ose miratoni metodën e pjekjes me dy faza

    Ciklet A-5 PCR

    ■ Shumë cikle PCR —— Zvogëloni numrin e cikleve të PCR.

    Pyetje: Shirita me njolla ose njollosje

    Abetare A-1—— Specifikiteti i dobët —— Rizajnoni abetaren, ndryshoni pozicionin dhe gjatësinë e abetares për të rritur specifikën e saj; ose të kryejë PCR të futur.

    ADN-ja e modelit A-2

    —— Shablloni nuk është i pastër ——Pastroni shabllonin ose nxirrni ADN -në me komplete pastrimi.

    A-3 Mg2+ përqendrimit

    - —Mg2+ përqendrimi është shumë i lartë —— Ulni siç duhet Mg2+ përqendrimi: Optimizoni Mg2+ përqendrimi nga një seri reagimesh nga 1 mM në 3 mM me një interval prej 0.5 mM për të përcaktuar Mg optimale2+ përqendrim për çdo shabllon dhe abetare.

    A-4 dNTP

    —— Përqendrimi i dNTP -ve është shumë i lartë ——Ulni përqendrimin e dNTP -së në mënyrë të përshtatshme

    A-5 Temperatura e pjekjes

    —— Temperaturë shumë e ulët e pjekjes —— Rritni në mënyrë të përshtatshme temperaturën e pjekjes

    Ciklet A-6

    —— Shumë cikle —— Optimizoni numrin e ciklit

    Pyetje: Sa ADN shabllon duhet shtuar në një sistem reagimi PCR 50 μl?
    ytry
    Pyetje: Si të amplifikoni fragmente të gjata?

    Hapi i parë është të zgjidhni polimerazën e duhur. Polimeraza e rregullt Taq nuk mund të korrigjohet për shkak të mungesës së aktivitetit të ekzonukleazës 3'-5 'dhe mospërputhja do të zvogëlojë shumë efikasitetin e zgjerimit të fragmenteve. Prandaj, polimeraza e rregullt Taq nuk mund të amplifikojë në mënyrë efektive fragmentet e synuara më të mëdha se 5 kb. Polimeraza Taq me modifikim të veçantë ose polimerazë tjetër me besnikëri të lartë duhet të zgjidhet për të përmirësuar efikasitetin e zgjerimit dhe për të përmbushur nevojat e amplifikimit të fragmenteve të gjata. Për më tepër, amplifikimi i fragmenteve të gjata kërkon gjithashtu rregullimin përkatës të modelit të abetareve, kohën e çnaturimit, kohën e zgjatjes, pH tampon, etj. Zakonisht, abetaret me 18-24 bp mund të çojnë në rendiment më të mirë. Për të parandaluar dëmtimin e shabllonit, koha e denatyrimit në 94 ° C duhet të reduktohet në 30 sek ose më pak për cikël, dhe koha për të rritur temperaturën në 94 ° C para amplifikimit duhet të jetë më pak se 1 min. Për më tepër, vendosja e temperaturës së shtrirjes në rreth 68 ° C dhe dizajnimi i kohës së zgjatjes sipas shkallës prej 1 kb/min mund të sigurojë amplifikim efektiv të fragmenteve të gjata.

    Pyetje: Si të përmirësohet besnikëria e amplifikimit të PCR?

    Shkalla e gabimit të amplifikimit PCR mund të zvogëlohet duke përdorur polimeraza të ndryshme të ADN -së me besnikëri të lartë. Ndër të gjitha polimerazat e ADN -së Taq të gjetura deri më tani, enzima Pfu ka shkallën më të ulët të gabimit dhe besnikërinë më të lartë (shiko tabelën e bashkangjitur). Përveç përzgjedhjes së enzimave, studiuesit mund të zvogëlojnë më tej shkallën e mutacionit të PCR duke optimizuar kushtet e reagimit, duke përfshirë optimizimin e përbërjes tampon, përqendrimin e polimerazës termostabile dhe optimizimin e numrit të ciklit të PCR.

    Shkruani mesazhin tuaj këtu dhe na dërgoni