Sistemi PCR Golden Easy (me bojë)

Sistemi i thjeshtë i reagimit PCR me dy përbërës.

Mace. Jo Madhësia e Paketimit
4993003 250 U (2.5 U/μl)
4993004 500 U (2.5 U/μl)

Detajet e produktit

Shembull eksperimental

FAQ

Etiketat e produktit

Karakteristikat

Stability Stabilitet i mirë: Formula unike e bën të gjithë sistemin e reagimit shumë të qëndrueshëm. Sistemi përmban komponentët e kërkuar për amplifikimin efektiv të PCR, të tilla si polimeraza termostabile e ADN -së, dNTP -të, MgCl2 dhe zgjidhje tampon, si dhe një sërë stabilizuesish të veçantë, të cilët rrisin shumë qëndrueshmërinë e polimerazës dhe dNTP në temperaturë normale dhe 4.
■ E shpejtë dhe e thjeshtë: Funksionim i thjeshtë dhe i shpejtë. Thjesht përzieni dy përbërësit në proporcion dhe më pas shtoni shabllone dhe abetare për të krijuar reagimin, duke shmangur hapat e lodhshëm të shtimit të përbërësve të ndryshëm të reagimit PCR një nga një. Minimizoni gabimet e marrjes së mostrave dhe ndotjen e kryqëzuar, me pak gabime midis grupeve të ndryshme, dhe mund të përdoret në eksperimente gjysmë-sasiore.
Application Aplikim i gjerë dhe ndjeshmëri e lartë.
■ Çdo sistem reagimi përmban ngjyra, dhe elektroforeza mund të kryhet direkt pas hapave të PCR në mënyrë që procedura të jetë e shpejtë dhe të kursejë punën.

Kontrolli i cilësisë

Pastërtia e SDS-PAGE është më shumë se 99%; Asnjë aktivitet i nukleazës ekzogjene nuk zbulohet; Gjeni i vetëm në gjenomin njerëzor mund të amplifikohet në mënyrë efektive; Asnjë aktivitet i rëndësishëm nuk ruhet kur ruhet në temperaturën e dhomës për një javë.

Stabiliteti

Produkti që përdor sistemin e thjeshtë PCR me dy përbërës mund të ruhet në 4 ° C për një muaj pa ndryshim të dukshëm të aktivitetit.

Rrjedha e punës

Hapi 1: Përzieni përbërës të ndryshëm në proporcion.

Hapi 2: Filloni eksperimentin menjëherë.

Hapi 3: Elektroforezë e drejtpërdrejtë për përzierjen me ngjyra.

Hapi 4: Rezultate të kënaqshme eksperimentale.

Final Reaction Concentration:

Të gjitha produktet mund të personalizohen për ODM/OEM. Per detaje,ju lutemi klikoni Shërbimi i personalizuar (ODM/OEM)


  • I mëparshëm:
  • Tjetra:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example Aplikohet sistemi i thjeshtë PCR me dy përbërës (Golden Easy PCR System). Sistemi i reagimit është 50 μl (Nëse sistemet e reagimit janë të ndryshme, ju lutemi rritni ose zvogëloni proporcionalisht sasinë e përbërësve të reagimit që i referohen këtij sistemi).
    Experimental Example Përqendrimi përfundimtar i reagimit
    Pyetje: Asnjë brez amplifikimi

    Modeli A-1

    ■ Shablloni përmban papastërti të proteinave ose frenues të Taq, etj. —— Pastroni modelin e ADN -së, hiqni papastërtitë e proteinave ose nxirrni ADN -në e shabllonit me komplete pastrimi.

    ■ Çnatyrimi i shabllonit nuk është i plotë —— Rritni në mënyrë të përshtatshme temperaturën e denatyrimit dhe zgjasni kohën e denatyrimit.

    Deg Degradimi i modelit ——Përgatitni sërish shabllonin.

    Abetare A-2

    Quality Cilësi e dobët e abetareve —— Ri-sintetizoni abetaren.

    Deg Degradimi i abetareve - —Aksitoni abetaret me përqendrim të lartë në vëllim të vogël për ruajtje. Shmangni ngrirjen dhe shkrirjen e shumëfishtë ose krio-ruajtur afatgjatë 4 ° C.

    Design Dizajnimi jo i duhur i abetareve (p.sh. gjatësia e abetareve nuk është e mjaftueshme, dimeri i formuar midis abetareve, etj.)

    A-3 Mg2+përqendrimit

    ■ Mg2+ Përqendrimi është shumë i ulët —— Rritni siç duhet Mg2+ përqendrimi: Optimizoni Mg2+ përqendrimi nga një seri reagimesh nga 1 mM në 3 mM me një interval prej 0.5 mM për të përcaktuar Mg optimale2+ përqendrim për çdo shabllon dhe abetare.

    A-4 Temperatura e pjekjes

    Temperature Temperatura e lartë e pjekjes ndikon në lidhjen e abetares dhe shabllonit. —— Ulni temperaturën e pjekjes dhe optimizoni gjendjen me një gradient prej 2 ° C.

    A-5 Koha e zgjatjes

    Time Koha e shkurtër e zgjatjes —— Rritja e kohës së zgjatjes.

    P: Pozitiv i rremë

    Fenomene: Mostrat negative gjithashtu tregojnë brezat e sekuencave të synuara.

    A-1 Kontaminimi i PCR

    Ndotja e kryqëzuar e sekuencës së synuar ose produkteve të amplifikimit —— Me kujdes që të mos pipetoni mostrën që përmban sekuencën e synuar në mostrën negative ose mos i derdhni nga tubi i centrifugës. Reagentët ose pajisjet duhet të autoklavohen për të eliminuar acidet nukleike ekzistuese, dhe ekzistenca e ndotjes duhet të përcaktohet përmes eksperimenteve të kontrollit negativ.

    Ndotja e reagentit —— Lini reagentët dhe ruajini në temperaturë të ulët.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ Përqendrimi është shumë i ulët —— Rritni siç duhet Mg2+ përqendrimi: Optimizoni Mg2+ përqendrimi nga një seri reagimesh nga 1 mM në 3 mM me një interval prej 0.5 mM për të përcaktuar Mg optimale2+ përqendrim për çdo shabllon dhe abetare.

    Design Hartimi i parregullt i abetareve, dhe sekuenca e synuar ka homologji me sekuencën jo të synuar. —— Abetaret e ri-dizajnuara.

    P: Përforcim jo-specifik

    Fenomene: Shiritat e amplifikimit PCR nuk janë në përputhje me madhësinë e pritshme, të mëdha ose të vogla, ose ndonjëherë ndodhin të dyja brezat e amplifikimit specifik dhe brezat e amplifikimit jo-specifik.

    Abetare A-1

    Specific Specifikë e dobët e abetareve

    —— Abetare e ridizajnuar.

    Concentration Përqendrimi i abetareve është shumë i lartë —— Rritni siç duhet temperaturën e denatyrimit dhe zgjasni kohën e denatyrimit.

    A-2 Mg2+ përqendrimit

    ■ Mg2+ përqendrimi është shumë i lartë —— Ulni siç duhet përqendrimin e Mg2+: Optimizoni Mg2+ përqendrimi nga një seri reagimesh nga 1 mM në 3 mM me një interval prej 0.5 mM për të përcaktuar Mg optimale2+ përqendrim për çdo shabllon dhe abetare.

    A-3 Polimerazë termostabile

    Amount Sasia e tepërt e enzimës —— Reduktoni sasinë e enzimës në mënyrë të përshtatshme në intervale prej 0.5 U.

    A-4 Temperatura e pjekjes

    Temperature Temperatura e pjekjes është shumë e ulët —— Rritni në mënyrë të përshtatshme temperaturën e pjekjes ose miratoni metodën e pjekjes me dy faza

    Ciklet A-5 PCR

    ■ Shumë cikle PCR —— Zvogëloni numrin e cikleve të PCR.

    Pyetje: Shirita me njolla ose njollosje

    Abetare A-1—— Specifikiteti i dobët —— Rizajnoni abetaren, ndryshoni pozicionin dhe gjatësinë e abetares për të rritur specifikën e saj; ose të kryejë PCR të futur.

    ADN-ja e modelit A-2

    —— Shablloni nuk është i pastër ——Pastroni shabllonin ose nxirrni ADN -në me komplete pastrimi.

    A-3 Mg2+ përqendrimit

    - —Mg2+ përqendrimi është shumë i lartë —— Ulni siç duhet Mg2+ përqendrimi: Optimizoni Mg2+ përqendrimi nga një seri reagimesh nga 1 mM në 3 mM me një interval prej 0.5 mM për të përcaktuar Mg optimale2+ përqendrim për çdo shabllon dhe abetare.

    A-4 dNTP

    —— Përqendrimi i dNTP -ve është shumë i lartë ——Ulni përqendrimin e dNTP -së në mënyrë të përshtatshme

    A-5 Temperatura e pjekjes

    —— Temperaturë shumë e ulët e pjekjes —— Rritni në mënyrë të përshtatshme temperaturën e pjekjes

    Ciklet A-6

    —— Shumë cikle —— Optimizoni numrin e ciklit

    Pyetje: Sa ADN shabllon duhet shtuar në një sistem reagimi PCR 50 μl?
    ytry
    Pyetje: Si të amplifikoni fragmente të gjata?

    Hapi i parë është të zgjidhni polimerazën e duhur. Polimeraza e rregullt Taq nuk mund të korrigjohet për shkak të mungesës së aktivitetit të ekzonukleazës 3'-5 'dhe mospërputhja do të zvogëlojë shumë efikasitetin e zgjerimit të fragmenteve. Prandaj, polimeraza e rregullt Taq nuk mund të amplifikojë në mënyrë efektive fragmentet e synuara më të mëdha se 5 kb. Polimeraza Taq me modifikim të veçantë ose polimerazë tjetër me besnikëri të lartë duhet të zgjidhet për të përmirësuar efikasitetin e zgjerimit dhe për të përmbushur nevojat e amplifikimit të fragmenteve të gjata. Për më tepër, amplifikimi i fragmenteve të gjata kërkon gjithashtu rregullimin përkatës të modelit të abetareve, kohën e çnaturimit, kohën e zgjatjes, pH tampon, etj. Zakonisht, abetaret me 18-24 bp mund të çojnë në rendiment më të mirë. Për të parandaluar dëmtimin e shabllonit, koha e denatyrimit në 94 ° C duhet të reduktohet në 30 sek ose më pak për cikël, dhe koha për të rritur temperaturën në 94 ° C para amplifikimit duhet të jetë më pak se 1 min. Për më tepër, vendosja e temperaturës së shtrirjes në rreth 68 ° C dhe dizajnimi i kohës së zgjatjes sipas shkallës prej 1 kb/min mund të sigurojë amplifikim efektiv të fragmenteve të gjata.

    Pyetje: Si të përmirësohet besnikëria e amplifikimit të PCR?

    Shkalla e gabimit të amplifikimit PCR mund të zvogëlohet duke përdorur polimeraza të ndryshme të ADN -së me besnikëri të lartë. Ndër të gjitha polimerazat e ADN -së Taq të gjetura deri më tani, enzima Pfu ka shkallën më të ulët të gabimit dhe besnikërinë më të lartë (shiko tabelën e bashkangjitur). Përveç përzgjedhjes së enzimave, studiuesit mund të zvogëlojnë më tej shkallën e mutacionit të PCR duke optimizuar kushtet e reagimit, duke përfshirë optimizimin e përbërjes tampon, përqendrimin e polimerazës termostabile dhe optimizimin e numrit të ciklit të PCR.

    Shkruani mesazhin tuaj këtu dhe na dërgoni